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层析柱的装载步骤

发布日期:2012-12-04      点击:703

       层析柱适用于分子筛、离子交换、凝胶渗透与亲和层析。随着液相层析法进入血液制品生产,利用层析法,可纯化血浆中多种蛋白,例如白蛋白等等。层析柱也是生物化学、石油化工、化学分析、疾病诊断等实验室及医学制药的中试及大规模生产*的佳层析工具。产品的装载需要注意:

1.装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同;

2.填料要加水搅拌成均匀悬液,悬液浓度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱内,或吸或压,流速和具体步骤看说明书。

3.所有柱子尽量做到填料均匀,尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后,可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2-4倍,在此范围内越小越好。

4.选择合适的泵,**是流速满足要求,脉冲尽量小。

5.准备上柱的液体应进行过滤,至少是0.45m。

6.关于纯化,**要考虑的是你的目标:纯度、数量、速度、收率等等,再根据样品的具体情况,尤其是目标蛋白的性质,确定纯化策略。通常三步曲:*步先从大量或复杂样品中将目标蛋白抓出,与主要杂质分离;再用高选择性的层析去除绝大部分杂质;后精细纯化,提供纯度至设定目标。到实际工作中,具体情况具体分析。

7.装柱包括以后使用中不允许柱内进入气泡,柱头事先也要排除气泡。

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